一文看懂蛋白質(zhì)提取液分離純化技術(shù)對(duì)比
　　蛋白質(zhì)在組織或細(xì)胞中一般都是以復(fù)雜的混合物形式存在，每種類(lèi)型的細(xì)胞都含有成千種不同的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的分離和提純工作是一項(xiàng)艱巨而繁重的任務(wù)，到目前為止，還沒(méi)有一個(gè)單獨(dú)的或一套現(xiàn)成的方法能把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合物中提取出來(lái)，但對(duì)任何一種蛋白質(zhì)都有可能選擇一套適當(dāng)?shù)姆蛛x提純程序來(lái)獲取高純度的制品。
　　不同種類(lèi)的蛋白質(zhì)在分子大小方面有一定的差別，可用一些簡(jiǎn)便的方法，使蛋白質(zhì)混合物得到初步分離。
　　1、蛋白質(zhì)提取液分離純化透析和超濾
　　透析在純化中極為常用，可除去鹽類(lèi)(脫鹽及置換緩沖液)、有機(jī)溶劑、低分子量的抑制劑等。透析膜的截留分子量為5000左右，如分子量小于10000的酶液就有泄露的危險(xiǎn)，在純化中極為常用，可除去鹽類(lèi)、有機(jī)溶劑、低分子量的抑制劑等。超濾一般用于濃縮和脫色。
　　2、離心分離置換緩沖液
　　許多酶富集于某一細(xì)胞器內(nèi)，勻漿后離心得得到某一亞細(xì)胞成分，使酶富集10~20倍，再對(duì)特定的酶進(jìn)行純化。差速離心，分辨率較低，僅適用于粗提或濃縮。速率區(qū)帶法，如離心時(shí)間太長(zhǎng)所有的物質(zhì)都會(huì)沉淀下來(lái)，故需選擇分離時(shí)間，可得到相當(dāng)純的亞細(xì)胞成分用于進(jìn)一步純化，避免了差速離心中大小組分一起沉淀的問(wèn)題，但容量較小，只能用于少量制備。等密度梯度離心常用的離主介質(zhì)有蔗糖、聚蔗糖、氯化銫、溴化鉀、碘化鈉等等。
　　3、凝膠過(guò)濾
　　這是根據(jù)分子大小分離蛋白質(zhì)混合物有效的方法之一，注意使要離的蛋白質(zhì)分子量落在凝膠的工作范圍內(nèi)。選擇不同的分子量凝膠可用于脫鹽、置換緩沖液及利用分子量的差異除去熱源。